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标题: 牛血清白蛋白的制备方法以及注意事项 [打印本页]

作者: 我爱化学 时间: 2018-11-26 15:46
标题: 牛血清白蛋白的制备方法以及注意事项
元素百科为您介绍牛血清白蛋白的制备方法以及注意事项。，牛血清白蛋白又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent。

牛血清白蛋白的制备方法

试管编号 0 1 2 3 4 5 6

100ug/ml标准蛋白（ml）0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

0.15mol/L NaCl（ml）1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4

考马斯亮蓝试剂（ml）5 5 5 5 5 5 5

摇匀，1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色

3、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。

（1）利用标准曲线查出回归方程。

（2）用公式计算回归方程。

（3）或用origin作图，测出回归线性方程。即A595nm=a×X( )+6

一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。

(4）绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。

含量的测定

样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。

一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。

牛血清白蛋白的注意事项

1. 玻璃仪器要洗涤干净。

2. 取量要准确。

3. 玻璃仪器要干燥，避免温度变化。

4. 对照：用被测物质以外的物质作空白对照。

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